自動DNA合成儀的操作要點(diǎn)

        1. 合成開始后的檢查點(diǎn)
        合成開始時，檢查第二個核苷酸 de-DMT 產(chǎn)生的橙色，以確保一切正常。 * DMT 的顏色不能用作提供信息的基礎(chǔ)，因?yàn)樗?* 裝載到載體中的核苷的量度。檢查合成柱是否泄漏。泄漏的原因可能是色譜柱錯誤或色譜柱上的魯爾接頭和合成器沒有擰緊。檢查監(jiān)視器上的詳細(xì)信息并在必要時恢復(fù)所需的參數(shù)。
         2、試劑在DNA自動合成儀上的穩(wěn)定性
        無論合成程度如何，試劑管道中的單體都需要每隔幾分鐘補(bǔ)充一次，不會出現(xiàn)嚴(yán)重的亞磷酰胺分解。但如果儀器運(yùn)行時間不超過1小時，合成前必須清洗試劑管道，去除管內(nèi)分解的試劑。即使在這種條件下，試劑的壽命也是有限的。因此，在合成儀上存放超過 2 周的試劑應(yīng)丟棄；合成30堿基12 1-_寡核苷酸時，施磷酰胺和四唑在合成儀上的時間應(yīng)小于1周。合成50mer或更長的寡核苷酸，應(yīng)使用新鮮的亞磷酰胺、四唑和乙腈。
         3. 自動DNA合成儀上的試劑更換
        在合成過程中使用任何一種試劑都會導(dǎo)致合成失敗。因此，您必須在合成前檢查所有容器中的試劑量。如果實(shí)驗(yàn)室的溫度低于18~C，則需要使用吹風(fēng)機(jī)加熱儲液器以溶解一些晶體。如果某個位置配備了一次性塞子，請?jiān)趯⑿缕孔臃旁诤铣善魃蠒r檢查并更換塞子。不應(yīng)使用任何破裂的軟木塞，還應(yīng)檢查安全的軟木塞。另外，檢查試劑瓶邊緣是否有縫隙。缺口瓶未在合成儀上塞緊，試劑無法運(yùn)輸。
         4. 合成時更換試劑瓶。
        在特定循環(huán)中單體縮合、密封、氧化完成后，等待乙腈清洗，中斷循環(huán)和三列。然后按正常方法換瓶，取消所有中斷信息，重新開始合成。不要讓合成中斷超過 1 分鐘。這會降低耦合率或?qū)е潞铣墒　?/span>